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葡萄酒中抗氧化剂(叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚和2,6-二叔丁基对甲酚)的分析操作
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-24

1、适用范围

本方法适用于葡萄酒中抗氧化剂(叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚和2,6-二叔丁基对甲酚)的定性定量分析。

2、原理

葡萄酒中抗氧化剂(叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚和2,6-二叔丁基对甲酚)经过有机溶剂提取后,采用气相色谱一质谱选择离子方式检测,外标法定量。

3、仪器与试剂

(1)仪器:气相色谱-质谱仪配有自动进样器和电子轰击源(EI);分析天平;涡旋混匀器;超声波清洗器;离心机;氮吹浓缩仪。

(2)试剂:所有试剂除另有说明外,均为分析纯;试验中所用水均为二次蒸馏水;乙醚(色谱纯);丙酮(色谱纯);氯化钠;无水硫酸钠,于550℃灼烧4h,储存于干燥器中,冷却后备用。

①试剂配制:4%氯化钠溶液,称取4g氯化钠,用水溶解并定容至100mL。

(3)标准品:叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚和2,6-二叔丁基对甲酚标准品。

②混合抗氧化剂标准溶液:分别称取叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚和2,6-二叔丁基对甲酚1.0mg于同一个100mL容量瓶中,用丙酮溶解并定容至刻度,得到1.Omg/mL抗氧化剂混合标准溶液,放于冰箱中备用。

4、分析步骤

(1)标准系列的建立:分别吸取1.Omg/mL抗氧化剂混合标准溶液O.2mL、O.5mL、1.0mL、2.OmL、4.OmL于10mL容量瓶中,加丙酮至刻度,混匀后,得到抗氧化剂的标准系列度分别为20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL,待气相色谱-质谱分析测定。

(2)样品处理:准确称取样品1g(精确至O.001g)于25mL离心管中,加水约0.5mL,涡旋混匀1min,加乙醚5mL,涡旋混匀2min,静置,取出乙醚置于另外一个25mL离心管中,样品液中再加乙醚5mL,涡旋混匀2min,静置,取出乙醚,合并两次的乙醚提取液,加1mL 4%氯化钠溶液于乙醚提取液中,涡旋混匀2min,静置,取出乙醚层,过无水硫酸钠脱水后,氮气吹干,以5mL丙酮溶解,涡旋混匀1min,待气相色谱-质谱分析测定。

(3)样品测定

①气相色谱参考条件:色谱柱,DB-1701石英毛细管柱或相当类型毛细管柱(30m×O.25mm×O.25μm);色谱柱升温程序初始温度100℃,保持1min,以20℃/min升温至250℃,保持5 min;进样口温度250℃;传输线温度280℃;载气,高纯氦气,恒流模式,流速为1.OmL/min;进样模式,不分流进样;进样体积1.OμL。

②质谱分析参考条件:离子源EI;离子源能量70eV;离子源温度250℃;溶剂延迟3min;扫描模式,选择离子方式检测。抗氧化剂的定量离子和定性离子参数、检出限和定量限见表3—18;丁基羟基茴香醚的质谱图见图3—23,叔丁基对苯二酚的质谱图见图3—24,二叔丁基对甲酚的质谱图见图3—25。

5、结果计算

分别以标准系列中抗氧化剂的定量离子的峰面积对抗氧化剂的质量浓度进行线性回归计算,再按下式(3—4—3)计算测试样品中抗氧化剂的含量:

                                (3-4-3)

式中:Xi——测试样品中抗氧化剂的含量(mg/kg);

n——工作站外标法计算出样品测定液中对应的抗氧化剂的质量浓度(μg/mL);

V——样品最终的定容体积(mL);

m——样品的取样质量(g);

6、质量控制

(1)质谱定性按照欧盟规定,定量离子和定性离子比例在要求范围之内,将样品中目标化合物碎片离子与标准品谱图中的碎片离子对比查看,其中基峰的丰度为100%,另外2个碎片离子根据它与基峰的相对百分比不同有不同的允许偏差:丰度>50%的离子,允许偏差在土10%内,丰度在20%~50%的离子,允许偏差在士15%内,丰度在10%~20%的离子,允许偏差在±20%内,丰度≤10%的离子,允许偏差在±50%内,确认为目标化合物,保留时间定性时间窗口一般为O.02min。

(2)为了保证分析结果的准确,要求在分析每批样品时,进行样品加标50μg/mL和200μg/mL试验,计算添加回收率,测定添加回收率应在60%~120%范围之内。

参考资料:气相色谱-质谱在仪器安全监测中的应用


【关键词】葡萄酒,抗氧化剂,气相色谱-质谱法,国家标准物质网 

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