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护色剂的测定(一)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-25

一、亚硝酸盐的测定

亚硝酸盐测定采用盐酸萘乙二胺法,又称格里斯试剂比色法。

1、测定原理

样品经过沉淀蛋白质、去除脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,其最大吸收波长为538nm,且色泽深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量呈正比,可与标准系列比较定量。

2、试剂

①亚铁氰化钾溶液:称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H203,用水溶解,并稀释至1000mL。

②乙酸锌溶液:称取220.Og乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H20],加30mL冰乙酸溶于水,并稀释至1000mL。

③饱和硼砂溶液:称取5.0g硼酸钠(NaB407·10H20),溶于lOOmL热水中,冷却后备用。

④对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100mL 20%盐酸中,置棕色瓶中混匀,避光保存。

⑤盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺溶解于100mL水中,混匀后,

置棕色瓶中,避光保存。

⑥亚硝酸钠标准溶液(200μg/mL):准确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解后定容到500mL。

⑦亚硝酸钠标准使用液(5.Oμg/mL):临用前,吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL,置于200mL容量瓶中,加水稀释至刻度。

3、仪器

小型绞肉机;分光光度计。

4、操作方法

(1)样品处理:称取5.0~10.0g粉碎混匀的样品,置于50mL烧杯中,加12.5mL硼砂饱和液,搅拌均匀,用约300mL 70℃左右的热水将样品洗入500mL容量瓶中,于沸水浴中加热15min,冷却至室温。边转动容量瓶边加入5mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5mL乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质。加水至刻度,摇匀,放置0.5h,除去上层脂肪后过滤,弃去初滤液,滤液备用。

(2)测定:吸取40.OmL上述滤液于50mL具塞比色管中,另取0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL亚硝酸钠标准使用液(5.Oμg/mL),分别置于50mL具塞比色管中。于标准管与样品管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液(4g/L),混匀,静置3~5min后各加入lmL盐酸萘乙二胺溶液(2g/L),加水至刻度,混匀,静置15min,于波长538nm处测吸光度,并绘制标准曲线。同时做试剂空白实验。

5、结果计算

                       

式中:X——样品中亚硝酸盐的含量,mg/kg;

m——样品质量,g;

m’——测定用样液中亚硝酸盐的质量,μg;

V1——样品处理液总体积,mL;

V2——测定用样液体积,mL。

6、讨论

①本方法为国家标准法GB/T 5009.33--2003标准方法,亚硝酸盐最低检出限为1mg/kg。

②亚铁氰化钾和乙酸锌作为蛋白质沉淀剂,使产生的亚铁氰化锌沉淀与蛋白质产生共沉淀。蛋白质沉淀剂也可采用硫酸锌溶液(30%)。

③饱和硼砂溶液的作用:亚硝酸盐提取剂,同时也是蛋白质沉淀剂。

④对于含油脂多的样品,可撇去提取液中的上层脂肪;对于有色样品可用氢氧化铝乳液脱色后再进行显色反应。

⑤本测定用水应为重蒸馏水,以减少误差。

二、硝酸盐的测定——镉柱法

1、测定原理

样品溶液经过沉淀蛋白质、去除脂肪后,通过镉柱,使其中的硝酸盐还原为亚硝掌盐,在弱酸性条件下,亚硝酸盐与对氨苯基磺酸重氮化,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,测得亚硝酸盐总量。另取一份样品溶液,不通过镉柱,直接测定其中的亚硝酸盐含量,由总量减去样品中原有的亚硝酸盐含量,即得硝酸盐含量。

2、试剂

①氨缓冲溶液(pH9.6~9.7)量取20mL盐酸,加50mL水,混匀后加50mL氨水,再加水稀释至1000mL,混匀。

②稀氨缓冲液量取50mL氨缓冲溶液,加水稀释至500mL,混匀。

③酸(O.1mol/L)。

④硝酸钠标准溶液(200μg/mL) 准确称取0.1232g于110~120℃干燥恒重的硝酸钠,加7k溶解,移入500mL容量瓶中,并稀释至刻度。

⑤硝酸钠标准使用液(5.Oμg/mL) 临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50mL,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。

⑥亚硝酸钠标准使用液(5.Oμg/mL)。

⑦盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺溶解于lOOmL水中,混匀后,置棕色瓶中,避光保存。

3、仪器(镉柱)

(1)海绵状镉的制备:投入足够的锌皮或锌棒于500mL硫酸镉溶液(200g/L)中,经3~4h后,当其中的镉全部被锌置换后,用玻璃棒轻轻刮下,取出残余锌棒,使镉沉底,倾去上层清液,以水用倾泻法多次洗涤。然后移入组织捣碎机中,加500mL水,捣碎约2s,用水将金属细粒洗至标准筛上,取20~40目之间的部分装柱。

(2)镉柱的装填:用水装满镉柱玻璃管,并装入2cm高的玻璃棉作垫,将玻璃棉压向柱底时,应将其中所包含的空气全部排出,在轻轻敲击下加人海绵状铺至8~10cm高,上面用lcm高的玻璃棉覆盖,上置一储液漏斗,末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。如无上述镉柱玻璃管时,可以用25mL酸式滴定管替代。当铺柱填装好后,先用25mL盐酸(0.1mol/L)洗涤,再用水洗两次,每次25mL。镉柱不用时用水封盖,随时都要保持水平面在镉层之上,不得使铺层中夹有气泡,见图7-1。镉柱每次使用完毕后,应先以25mL盐酸(0.1mol/L)洗涤。

再用水洗两次,每次25mL,最后用水封盖镉柱。

参考资料:食品检测验证手机自动送彩金59


【关键词】护色剂,食品添加剂,食品检测国家标准物质网 

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