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TLC测定黄曲霉毒素B1(二)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-28

滴加试样如下。

第一点:黄曲霉毒素B1标准液(0.04pg/mL)10μL。

第二点:样液20 μL,如样液8g/mL时也可点IO/μL。

第三点:样液20μL,加黄曲霉毒素B1标准液(0.04>g/mL)1O>L。

第四点:样液20μL加黄曲霉毒素B1标准液(O.2μg/mL)1O/μL。

(3)展开与观察:在展开槽(层析缸)内加无水乙醚lOmL,预展12cm,取出挥干,再于另一展开槽内用丙酮一氯仿液(8+92)展开10~12cm,取出在紫外光(365nm)下观察,结果如下。

样液点上加黄曲霉毒素B1标准溶液,可使黄曲霉毒素B1标准点与样液中的黄曲霉毒素Bl荧光点重叠。如样液为阴性,薄层板上的第三点黄曲霉毒素BI为0.0004μg,可用作检查在样液内黄曲霉毒素B1最低检出量是否正常出现;如为阳性,则起定位作用。薄层板上的第四点中黄曲霉毒素Bl为0.002μg,主要起定位作用。若第二点在与黄曲霉毒素B1标准点的相应位置上无蓝色荧光点,表示样品中黄曲霉毒素B1含量在5μg/kg以下;如在相应位置上有蓝紫色荧光点,则需要确证试验。

(4)确证试验:为了证实薄层板上样液荧光是由黄曲霉毒素B1产生的,滴加三氟乙酸产生黄曲霉毒素B1的衍生物,展开后,这种衍生物的比移值约在0.1左右。其方法如下。

在薄层板左边依次滴加两个点。

第一点:样液20μL。

第二点:黄曲霉毒素B1标准溶液(O.2μg/mL)1O/μL。

以上两点各加三氟乙酸一小滴盖于样点上,反应5min后,用吹风机吹热风2min,使热风吹到薄层板上的温度不高于400C,再于薄层板上滴加2个点。

第三点:样液20μL。

第四点:黄曲霉毒素B1标准溶液(0.2μg/mL)10μL。

再展开同前,在紫外灯光下观察样液是否产生与黄曲霉毒素Bl相同的衍生物,未加三氟乙酸的第三点和第四点,可依次作为样液与标准的衍生物空白对照。

(5)稀释定量:样液中的黄曲霉毒素B1荧光点的荧光强度如与黄曲霉毒素Bl标准点的最低检出量(O.0004μg)的荧光强度一致,则样品中的黄曲霉毒素B1定量即为5μg/kg;如样品中的荧光强度比最低检出量强,则根据强度估计减少滴加体积(μL)或将样液稀释后,再滴加不同的体积(μL),如10μL、15μL,直至样液点的荧光强度与最低检出量点的荧光强度一致为止。

滴加试样如下。

第一点:黄曲霉毒素B1标准液(0.04μg/mL):

第二点、第三点、第四点根据情况滴加样液

五、结果计算

式中:V1——加入苯-乙腈混合液的体积,mL;

V2——出现最低荧光时滴加样液的体积,mL;

D——样液的总稀释倍数;

M——苯-乙腈溶解的试样质量,g;

0.004——黄曲霉毒素B1的最低检出量,μg

六、注意事项

①黄曲霉菌所产生的代谢产物具有较强毒性,自然界中易被其污染的有玉米、花生等,代谢物中以黄曲霉毒素B1最多,黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2较少。故一般仅作黄曲霉毒素B1测定。

在测定中,一粒黄曲霉毒素含量高的霉粒就可以左右测定结果,而有毒霉粒在整个检品中所占比例是很小的,而分布又不均匀,为避免采样带来的误差,取样量应尽量多一些(1000g),并将取样充分混合均匀后粉碎。在取样时应注意:根据规定检取有代表性样品;对局部霉变样,应单独取样检验;每份分析测定用样品,应将大样经粗碎后连续多次用四分法分样至500~1000g再全部粉碎样品,通过20目筛。花生不易过筛,但应磨到一定程度并充分混合均匀。

①据以上实验条件,黄曲霉毒素B1的最低检出量是O.0004μg,方法的灵敏度为5μg/kg,回收率约为75%以上。

③展开剂丙酮与氯仿比例可随比移值大小与分离情况而调节,如果比移值太大,可减少丙酮体积,反之则增加。

④在气候潮湿的条件下,薄层板的活性容易降低,影响检出量,因此在使用薄层板时,当日活化为好;滴加样液和标准液时,可将板放在盛有干燥剂(硅胶)的层析槽内进行。

参考资料:食品检测验证手机自动送彩金59


【关键词】黄曲霉毒素,食品检测国家标准物质网 

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